Plasmide CRISPR d'Activation (h) SRp30c: sc-403790-ACT

SRSF9 code le facteur humain d’épissage riche en sérine/arginine SRp30c, une protéine liant l’ARN qui régule l’épissage constitutif et alternatif des pré‑ARNm et contribue à la définition des exons. SRp30c influence la production d’isoformes de transcrits et les choix de maturation de l’ARN, en interaction avec l’assemblage du spliceosome, l’export des ARNm et des programmes plus larges d’expression génique. Une activité ou une expression altérées des régulateurs d’épissage de la famille SR peut déplacer l’équilibre des isoformes au sein des réseaux du cycle cellulaire, de réponse au stress et de différenciation, reliant ainsi la dérégulation de l’épissage à des états transcriptionnels associés aux maladies. Par conséquent, SRSF9 est fréquemment étudié pour son rôle dans le contrôle post‑transcriptionnel et pour cartographier des voies de régulation dépendantes de l’épissage dans les cellules humaines.

SRp30c Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SRSF9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SRp30c Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SRSF9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SRSF9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SRp30c. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SRSF9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SRp30c au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SRp30c dans les cellules tumorales présentant une expression de SRSF9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.