SREBP-2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-423153-ACT

Das murine Gen Srebf2 kodiert das Sterol-Regulatory-Element-Binding-Protein 2 (SREBP-2), einen membrangebundenen Transkriptionsfaktor, der als Reaktion auf erniedrigte intrazelluläre Sterolspiegel durch Proteolyse aktiviert wird. Aktiviertes SREBP-2 transloziert in den Zellkern und induziert Gene, die die Cholesterinbiosynthese und -aufnahme steuern, darunter zentrale Komponenten des Mevalonatwegs sowie die LDL-Rezeptor-vermittelte Cholesterinhomöostase. Diese regulatorische Achse koordiniert die Lipidverfügbarkeit mit der Membranbiogenese und metabolischer Umprogrammierung und überschneidet sich mit der ER-Stress-Signalgebung sowie der Feedback-Kontrolle der Sterol-Sensorik. Eine fehlregulierte SREBP-2-Aktivität wurde mit veränderten Phänotypen des Lipidstoffwechsels in Verbindung gebracht und trägt zu mechanistischen Studien kardiometabolischer und leberrelevanter Krankheitswege in Mausmodellen bei.

SREBP-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Srebf2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SREBP-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Srebf2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Srebf2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SREBP-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Srebf2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SREBP-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SREBP-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Srebf2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.