Plasmide CRISPR/Cas9 KO SR-2C (h): sc-400886

Présentation

HTR2C code le récepteur humain de la sérotonine 2C (SR-2C), un récepteur couplé aux protéines G qui s’associe principalement à Gq/11 pour stimuler la signalisation de la phospholipase C, la production d’inositol trisphosphate, la mobilisation intracellulaire de Ca2+ et l’activation de la protéine kinase C. SR-2C active également les voies MAPK/ERK et module l’excitabilité neuronale ainsi que la transmission synaptique via des effets sur l’activité des canaux ioniques et la dynamique des seconds messagers. Dans le système nerveux central, HTR2C contribue à la régulation de l’appétit, de l’humeur, de la réponse au stress et des sorties endocrines, en intégrant les signaux sérotoninergiques à des programmes transcriptionnels et métaboliques en aval. Une dérégulation de la signalisation 5‑HT2C ainsi que des variations d’édition de l’ARN/épissage au sein de HTR2C ont été associées dans la littérature de recherche à des phénotypes neuropsychiatriques et métaboliques, ce qui étaye son intérêt comme cible mécanistique pour des études de voies et de relations génotype–phénotype.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SR-2C (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HTR2C dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HTR2C, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HTR2C à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SR-2C.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HTR2C pour l'étude de la signalisation de SR-2C, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HTR2C essentiels à la fonction de SR-2C
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HTR2C pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SR-2C plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SR-2C plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HTR2C. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SR-2C plasmide HDR (h) et le SR-2C (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HTR2C pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HTR2C définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.