Plasmide Double Nickase (h) SR-2B: sc-402574-NIC

HTR2B code le récepteur humain 2B de la 5‑hydroxytryptamine (SR‑2B), un récepteur couplé aux protéines G qui s’associe principalement à Gq/11 pour stimuler la signalisation de la phospholipase C, le renouvellement des phosphates d’inositol, la mobilisation du Ca²⁺ intracellulaire et l’activation en aval des voies PKC/MAPK. SR‑2B peut également activer une signalisation dépendante de la β‑arrestine et la désensibilisation du récepteur, reliant les signaux sérotoninergiques à des programmes transcriptionnels qui régulent la prolifération cellulaire, la migration et le remodelage de la matrice extracellulaire. L’activité de HTR2B est pertinente pour la biologie neurovasculaire et la signalisation sérotoninergique périphérique, avec des associations rapportées à des phénotypes cardiopulmonaires et neuropsychiatriques dans des études génétiques et fonctionnelles. En recherche biomédicale, HTR2B est souvent étudié comme modulateur des interactions entre récepteurs (« cross-talk ») et du comportement des réseaux de GPCR dans des systèmes où la sérotonine influence des réponses développementales, inflammatoires ou de remodelage tissulaire.

SR-2B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HTR2B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HTR2B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HTR2B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HTR2B.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.