Plasmide CRISPR d'Activation (m) SR-2B: sc-420994-ACT

Htr2b chez la souris code le récepteur de la sérotonine SR-2B (5‑HT2B), un récepteur couplé aux protéines G qui signale principalement via Gq/11 pour activer la phospholipase C, le renouvellement des phosphates d’inositol, la mobilisation du Ca²⁺ intracellulaire et des programmes transcriptionnels en aval dépendants de PKC/ERK. SR-2B module la neuromodulation et la signalisation sérotoninergique périphérique, influençant l’excitabilité neuronale, le tonus vasculaire et les réponses de remodelage tissulaire. Une activité altérée de Htr2b a été associée à une dérégulation des sorties des voies de la sérotonine, pertinente pour des phénotypes neurocomportementaux, des processus de remodelage cardiovasculaire et pulmonaire, ainsi que des contextes de signalisation inflammatoire. En tant que nœud récepteur membranaire, SR-2B constitue un point d’entrée exploitable pour étudier l’expression génique induite par les récepteurs, le couplage des seconds messagers et les interactions entre voies avec les réseaux MAPK et dépendants du calcium.

SR-2B Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Htr2b sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SR-2B Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Htr2b dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Htr2b, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SR-2B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Htr2b natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SR-2B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SR-2B dans les cellules tumorales présentant une expression de Htr2b silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.