Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
SR-2A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401532
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- SR-2A El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico SR-2A, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SR-2A Anticuerpo (A-4): sc-166775
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
SR-2A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401532 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
HTR2A codifica el receptor humano de 5‑hidroxitriptamina 2A (SR‑2A), un receptor acoplado a proteína G que se acopla principalmente a Gq/11 para estimular la señalización de la fosfolipasa C, el recambio de fosfatos de inositol, la movilización intracelular de Ca²⁺ y la activación de la proteína quinasa C. SR‑2A modula la excitabilidad neuronal y la plasticidad sináptica, y se integra en redes neurotransmisoras más amplias mediante el diálogo cruzado con MAPK/ERK y otras vías relacionadas de segundos mensajeros. Los cambios en la expresión y la señalización de HTR2A se investigan con frecuencia en el contexto de fenotipos neuropsiquiátricos, incluidos el tono serotoninérgico alterado y la función de circuitos corticales mediada por receptores. Como receptor de membrana con dinámicas regulatorias complejas, SR‑2A constituye un nodo abordable para analizar la señalización específica de vías y los mecanismos de desensibilización/internalización del receptor en modelos celulares humanos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO SR-2A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HTR2A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HTR2A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HTR2A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SR-2A.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HTR2A para la investigación de la señalización de SR-2A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de HTR2A críticos para la función de SR-2A
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HTR2A para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido SR-2A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SR-2A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HTR2A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SR-2A (h) y el plásmido HDR SR-2A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HTR2A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HTR2A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.