Squalene epoxidase Double Nickase Plasmid (h): sc-402870-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Squalene epoxidase Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Squalene epoxidase Double-Nickase-Plasmid (h) und Squalene epoxidase Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SQLE abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Squalene epoxidase: sc-271651
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Squalene epoxidase Double Nickase Plasmid (h) | sc-402870-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Squalene epoxidase Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402870-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SQLE kodiert die Squalenepoxidase, eine flavinabhängige Monooxygenase, die die Epoxidierung von Squalen zu 2,3‑Oxidosqualen katalysiert – ein früher, geschwindigkeitsbestimmender Schritt in der Cholesterin- und Sterolbiosynthese. Als mit dem endoplasmatischen Retikulum assoziiertes Enzym trägt sie zur Regulation der Sterolhomöostase bei und ist mit dem Fluss des Mevalonatwegs, der Dynamik von Lipidtröpfchen sowie der Feedback‑Kontrolle der Membranzusammensetzung verknüpft. Eine Störung der SQLE‑Aktivität kann zelluläre Lipidprofile umgestalten und dadurch Signalplattformen sowie die metabolische Anpassung unter Stress beeinflussen. Eine veränderte Regulation der Sterolbiosynthese unter Beteiligung von SQLE wurde mit dyslipidämieassoziierten Phänotypen und metabolischer Reprogrammierung in mehreren Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistischen Knotenpunkt in der Lipidstoffwechselforschung stützt.
Squalene epoxidase Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SQLE-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SQLE abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SQLE-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SQLE-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.