Squalene epoxidase Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402870-ACT

SQLE codifica a epoxidase de esqualeno, uma mono-oxigenase dependente de flavina que catalisa a epoxidação do esqualeno a 2,3-oxidoesqualeno, uma etapa comprometida e determinante da taxa na biossíntese de esteróis. Essa enzima associada ao RE ajuda a controlar os níveis de colesterol e de outros esteróis, ligando a atividade de SQLE à composição da membrana, à dinâmica de lipid rafts e à disponibilidade de precursores esteroidogênicos. SQLE é regulada pelo estado lipídico celular e interage com programas metabólicos conduzidos por SREBP que coordenam a homeostase do colesterol e o metabolismo lipídico de forma mais ampla. A expressão desregulada de SQLE tem sido associada a alterações no fluxo de esteróis e à reprogramação metabólica observada em múltiplos contextos relevantes para doenças, incluindo estados proliferativos e inflamatórios.

Squalene epoxidase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SQLE sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Squalene epoxidase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SQLE em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SQLE, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Squalene epoxidase. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SQLE nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Squalene epoxidase no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Squalene epoxidase em células tumorais com expressão de SQLE silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.