Plásmido Doble Nickase (m) SQSTM1/p62: sc-422075-NIC

El gen murino **Sqstm1** codifica **SQSTM1/p62**, un adaptador multifuncional que se une a carga poliubiquitinada mediante su dominio UBA y la conecta con autofagosomas positivos para LC3 a través de un motivo LIR, coordinando la autofagia selectiva y la proteostasis. **SQSTM1/p62** también actúa como andamiaje de complejos de señalización en la respuesta al estrés oxidativo **KEAP1–NRF2** y en la señalización de **NF-κB**, integrando la detección de nutrientes y las señales inflamatorias. Como nodo inducible por estrés, la regulación alterada de **SQSTM1/p62** afecta el flujo autofágico, la eliminación de agregados y el control de calidad mitocondrial, procesos que se investigan con frecuencia en modelos de neurodegeneración, disfunción metabólica y biología tumoral. Sus funciones en la señalización por ubiquitina y en ensamblajes proteicos separados por fases lo convierten en un parámetro central en estudios de estrés proteotóxico y señalización de la inmunidad innata.

SQSTM1/p62 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Sqstm1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Sqstm1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Sqstm1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Sqstm1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.