Plásmido CRISPR de Activación (m) SQSTM1/p62: sc-422075-ACT

El gen murino *Sqstm1* codifica SQSTM1/p62, un adaptador multifuncional que se une a la carga ubiquitinada y a LC3 para coordinar la autofagia selectiva, incluida la agrefagia y la mitofagia, al tiempo que integra la señalización de respuesta al estrés. Mediante interacciones con KEAP1, SQSTM1/p62 modula la transcripción antioxidante dependiente de NRF2 y actúa como andamio para vías como NF-κB y mTORC1, que conectan la detección de nutrientes con la inflamación y la proteostasis. Las alteraciones en la abundancia o el flujo de SQSTM1/p62 se usan con frecuencia como lectura de recambio autofágico y son relevantes para la investigación sobre agregación proteica, estrés oxidativo y señalización inmunitaria en la neurodegeneración, la disfunción metabólica y la biología del cáncer. En modelos murinos, la perturbación de *Sqstm1* ayuda a dilucidar cómo la autofagia y la señalización por ubiquitina moldean la homeostasis tisular y la adaptación al estrés.

SQSTM1/p62 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Sqstm1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SQSTM1/p62 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Sqstm1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Sqstm1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SQSTM1/p62. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Sqstm1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SQSTM1/p62 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SQSTM1/p62 en células tumorales con expresión de Sqstm1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.