Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
SPTLC1 Double Nickase Plasmid (m): sc-435265-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SPTLC1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SPTLC1 Double-Nickase-Plasmid (m) und SPTLC1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Sptlc1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SPTLC1: sc-374143
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SPTLC1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-435265-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SPTLC1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-435265-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Sptlc1 kodiert die Serin-Palmitoyltransferase‑Untereinheit 1 für langkettige Basen (SPTLC1), eine zentrale Komponente des Serin-Palmitoyltransferase‑Komplexes, der den ersten und geschwindigkeitsbestimmenden Schritt der De‑novo‑Sphingolipidbiosynthese katalysiert. Durch die Steuerung der Produktion von Sphingoidbasen sowie nachgeschalteten Ceramiden und Sphingomyelinen trägt SPTLC1 zur Regulation der Membranzusammensetzung, der Lipidsignalisierung und der Organellenfunktion bei, einschließlich der Homöostase des endoplasmatischen Retikulums (ER). Eine veränderte SPTLC1‑Aktivität kann den Sphingolipidfluss stören und dadurch Prozesse wie Stressantworten, die mitochondriale Physiologie und die Erhaltung von Neuronen beeinflussen. Eine Fehlregulation von SPTLC1 wird mit Erkrankungen in Verbindung gebracht, die auf einem Ungleichgewicht der Sphingolipide beruhen, was seine Nutzung in mechanistischen Studien des Lipidstoffwechsels und der Neurobiologie unterstützt.
SPTLC1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Sptlc1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Sptlc1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Sptlc1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Sptlc1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.