Plasmide CRISPR d'Activation (h) SPT6: sc-406219-ACT

Le gène humain **SUPT6H** code **SPT6**, un facteur conservé d’élongation de la transcription et associé à la chromatine, qui se lie au CTD phosphorylé de l’ARN polymérase II et coordonne le réassemblage des nucléosomes pendant la transcription active. **SPT6** agit avec des facteurs tels que **IWS1/ALYREF** pour coupler l’élongation au traitement co‑transcriptionnel de l’ARNm, notamment l’épissage et l’export de l’ARN, contribuant ainsi à la fidélité transcriptionnelle et à la stabilité du génome. En régulant la structure de la chromatine et la dynamique de l’élongation, **SUPT6H** influence de vastes programmes d’expression génique liés à l’identité cellulaire, à la prolifération et aux réponses au stress. Une dérégulation du contrôle transcriptionnel dépendant de **SPT6** a été impliquée dans une signalisation oncogénique aberrante et des états de différenciation altérés, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques sur l’addiction transcriptionnelle et la vulnérabilité épigénétique.

SPT6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SUPT6H sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SPT6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SUPT6H dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SUPT6H, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SPT6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SUPT6H natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SPT6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SPT6 dans les cellules tumorales présentant une expression de SUPT6H silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.