Plasmide CRISPR/Cas9 KO SPRED1 (h): sc-402981

Présentation

SPRED1 (protéine 1 contenant un domaine EVH1 apparentée aux Sprouty) est un régulateur négatif de la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase, qui freine la cascade Ras–RAF–MEK–ERK/MAPK en s’associant au complexe Ras-GAP de la neurofibromine (NF1). En limitant l’activation d’ERK dépendante des facteurs de croissance, SPRED1 influence la prolifération, la différenciation et la migration cellulaires dans de nombreux contextes tissulaires. Des variants perte de fonction de SPRED1 sont associés au syndrome de Legius ainsi qu’à des anomalies de la pigmentation et à des particularités du neurodéveloppement, et une activité réduite de SPRED1 peut moduler l’amplitude de la voie MAPK dans des réseaux de signalisation pertinents pour le cancer. SPRED1 est donc largement étudiée dans des modèles de biologie des rasopathies, de programmes transcriptionnels pilotés par ERK et de contrôle par rétroaction de la signalisation mitogène.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SPRED1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SPRED1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SPRED1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SPRED1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SPRED1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SPRED1 pour l'étude de la signalisation de SPRED1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SPRED1 essentiels à la fonction de SPRED1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SPRED1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SPRED1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SPRED1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SPRED1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SPRED1 plasmide HDR (h) et le SPRED1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SPRED1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SPRED1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.