Plasmide CRISPR/Cas9 KO SPEN (h): sc-406083

Présentation

SPEN (également appelé SHARP) code un grand corégulateur transcriptionnel nucléaire liant l’ARN, qui fait le lien entre des partenaires se fixant à l’ADN de manière spécifique de la séquence et des longs ARN non codants, et des complexes de modification de la chromatine. Grâce à ses interactions avec SMRT/HDAC et d’autres répresseurs apparentés, SPEN contribue à des programmes de silençage transcriptionnel, notamment l’inactivation du chromosome X dépendante de XIST, et influence l’expression génique spécifique de certaines lignées cellulaires. SPEN module aussi les sorties transcriptionnelles en réponse aux signaux, avec des liens rapportés à une régulation associée à Notch et, plus largement, au contrôle épigénétique de voies du développement et de l’immunité. Une dysrégulation de la fonction ou de l’expression de SPEN a été impliquée dans des états de différenciation altérés et dans le remaniement transcriptionnel observé dans de multiples contextes pathologiques, ce qui étaye son intérêt comme nœud mécanistique dans les études de régulation génique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SPEN (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SPEN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SPEN, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SPEN à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SPEN.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SPEN pour l'étude de la signalisation de SPEN, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SPEN essentiels à la fonction de SPEN
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SPEN pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SPEN plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SPEN plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SPEN. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SPEN plasmide HDR (h) et le SPEN (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SPEN pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SPEN définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.