Plasmide Double Nickase (m) SPATA2: sc-435216-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) SPATA2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SPATA2 Double Nickase (m) et le plasmide SPATA2 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Spata2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: SPATA2 Antibody (EE-31): sc-100946
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) SPATA2 | sc-435216-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) SPATA2 | sc-435216-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La souris *Spata2* code SPATA2, une protéine adaptatrice cytoplasmique qui coordonne la signalisation dépendante de l’ubiquitine et régule des voies inflammatoires ainsi que des voies de réponse au stress. SPATA2 s’associe au complexe de déubiquitinase CYLD et a été impliquée dans la modulation des signalisations NF-κB et MAPK en aval de signaux médiés par des récepteurs, influençant la survie cellulaire, l’apoptose et les réponses de l’immunité innée. Bien qu’initialement caractérisée dans le contexte de la spermatogenèse, SPATA2 joue un rôle plus général dans l’homéostasie cellulaire et la protéostase via le contrôle de l’édition des chaînes d’ubiquitine. La dérégulation des composants de l’axe SPATA2–CYLD est fréquemment étudiée dans des modèles d’inflammation, de dysfonction de la barrière épithéliale et de signalisation associée aux tumeurs, sans que cela n’implique des effets cliniques.
SPATA2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Spata2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Spata2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Spata2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Spata2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.