Plasmide Double Nickase (h) SPATA18: sc-407015-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) SPATA18 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SPATA18 Double Nickase (h) et le plasmide SPATA18 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SPATA18. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h) SPATA18 | sc-407015-NIC | 20 µg | $410.00 |
SPATA18 (également connu sous le nom de MIEAP) code une protéine induite en situation de stress qui participe au contrôle qualité mitochondrial en favorisant l’élimination, dépendante des lysosomes, ou la réparation des mitochondries endommagées, contribuant ainsi à préserver la fonction respiratoire et à limiter le stress oxydatif. Il est régulé en aval de la signalisation p53 et est associé à la dynamique mitochondriale, à des processus liés à la mitophagie, ainsi qu’aux réponses cellulaires aux dommages de l’ADN et au stress métabolique. Des altérations de l’activité de SPATA18 ont été associées à des phénotypes de dysfonction mitochondriale pertinents pour la biologie du cancer, la neurodégénérescence et la recherche cardiométabolique. L’étude de SPATA18 offre un levier pour décrypter comment la surveillance mitochondriale coordonnée par p53 influence les décisions de destinée cellulaire et l’homéostasie redox.
SPATA18 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SPATA18 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SPATA18. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SPATA18. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SPATA18.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.