Particules Lentivirales d'Activation (m) SP140: sc-436685-LAC

La souris Sp140 code SP140, une protéine nucléaire associée à la chromatine, enrichie dans les cellules immunitaires, qui contribue à façonner des programmes transcriptionnels liés à l’identité cellulaire et aux réponses inflammatoires. SP140 contient des domaines épigénétiques « lecteurs » qui se localisent à la chromatine et influencent l’accessibilité de loci restreints à certaines lignées, en s’intégrant à des voies qui gouvernent l’expression des gènes stimulés par l’interféron, la présentation de l’antigène et l’activation de l’immunité innée. Une altération de la fonction de SP140 a été associée à une dérégulation de la signalisation inflammatoire et à une susceptibilité à des phénotypes de maladies à médiation immunitaire, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques du contrôle transcriptionnel dans les compartiments myéloïdes et lymphoïdes. Dans des modèles murins, la perturbation de Sp140 est utilisée pour analyser comment la régulation de la chromatine s’articule avec la signalisation induite par les cytokines et la différenciation des cellules immunitaires.

Les particules d'activation lentivirales SP140 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Sp140 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales SP140 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Sp140, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de SP140. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Sp140 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.