Plasmide CRISPR d'Activation (m) Sox9: sc-423093-ACT

Le gène Sox9 de la souris code un facteur de transcription à domaine HMG (high-mobility group) qui agit comme régulateur maître de la spécification des lignages et de la morphogenèse tissulaire. Il intègre des signaux développementaux, notamment les voies TGF‑β/BMP, Wnt/β‑caténine et Hedgehog, afin de contrôler des programmes impliqués dans la chondrogenèse, la production de matrice extracellulaire et la différenciation épithéliale. L’activité de Sox9 façonne les décisions de destinée cellulaire et le maintien des progéniteurs par le contrôle transcriptionnel de gènes tels que Col2a1 et Acan, avec un dialogue croisé dépendant du contexte avec les facteurs de la famille Runx. Une expression ou une fonction dérégulée de Sox9 est impliquée dans des anomalies squelettiques congénitales, le remodelage associé à la fibrose et la plasticité de lignage liée au cancer, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques du développement et de la reprogrammation transcriptionnelle associée aux maladies.

Sox9 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Sox9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sox9 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Sox9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Sox9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sox9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Sox9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sox9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sox9 dans les cellules tumorales présentant une expression de Sox9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.