Plasmide Double Nickase (m2) Sox2: sc-423086-NIC-2

Le gène murin Sox2 code le facteur de transcription SOX2 de la famille SRY-box, un régulateur central de la pluripotence et de l’auto-renouvellement qui coopère avec OCT4 et NANOG pour maintenir l’identité des cellules souches embryonnaires tout en freinant un engagement prématuré vers des lignages différenciés. SOX2 se lie à des éléments d’amplificateur (enhancers) et de promoteur afin de piloter des programmes transcriptionnels qui gouvernent la spécification du neuroectoderme, le maintien des cellules souches/progénitrices neurales et les transitions d’état de la chromatine, en s’intégrant à des signaux tels que WNT, FGF, BMP et SHH qui façonnent l’organisation du développement. Une expression ou un dosage anormal de Sox2 est associé à des défauts de l’embryogenèse précoce et du neurodéveloppement, et des réseaux de régulation de SOX2 altérés sont fréquemment étudiés dans le cadre des états de type « stem-like » en biologie du cancer. L’édition génomique de Sox2 chez la souris permet d’explorer de manière mécanistique les circuits transcriptionnels, la fonction des enhancers, les décisions de destin cellulaire et les approches de reprogrammation dans des systèmes modèles du développement et de la maladie.

Sox2 Le plasmide double nickase (m2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Sox2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Sox2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Sox2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Sox2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.