Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sox2: sc-400050-ACT

SOX2 code le facteur de transcription Sox2, un régulateur central de la pluripotence et de l’auto-renouvellement, qui coopère avec OCT4 et NANOG pour maintenir l’identité des cellules souches tout en limitant l’engagement dans des lignages différenciés. Dans les cellules humaines, Sox2 contrôle des programmes géniques impliqués dans le remodelage de la chromatine, la spécification de l’ectoderme neural et des réseaux de signalisation du développement, notamment WNT, SHH, BMP, FGF et Notch. Une expression dérégulée de SOX2 est associée à des états de différenciation altérés, à une prolifération aberrante et à une plasticité cellulaire, et a été rapportée dans des contextes d’anomalies du neurodéveloppement et de biologie tumorale. Ces propriétés font de SOX2 une cible largement utilisée pour étudier les circuits transcriptionnels, la régulation épigénétique et les transitions de destinée cellulaire.

Sox2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SOX2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sox2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SOX2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SOX2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sox2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SOX2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sox2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sox2 dans les cellules tumorales présentant une expression de SOX2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.