Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sox10: sc-400129-ACT

Le gène humain **SOX10** code le facteur de transcription Sox10, une protéine de liaison à l’ADN du type **groupe à haute mobilité (HMG)**, essentielle à la spécification des cellules de la crête neurale et à l’engagement de lignage, en particulier dans les programmes gliaux et mélanocytaires. Sox10 coordonne des réseaux transcriptionnels qui contrôlent la différenciation, la migration et la survie, en s’intégrant à des voies du développement et au remodelage de la chromatine afin de réguler l’expression des gènes cibles dans le système nerveux périphérique. Une activité altérée de **SOX10** est associée à des neurocristopathies affectant le développement du système entérique et des glies périphériques, ainsi qu’à une biologie des mélanocytes dérégulée, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier les décisions de destin cellulaire et les circuits de régulation génique. En recherche biomédicale, **SOX10** est fréquemment utilisé pour analyser le contrôle transcriptionnel de la myélinisation, de la pigmentation et de la plasticité des cellules dérivées de la crête neurale.

Sox10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SOX10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sox10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SOX10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SOX10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sox10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SOX10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sox10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sox10 dans les cellules tumorales présentant une expression de SOX10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.