Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sox-30: sc-405112-ACT

Le gène humain **SOX30** code **Sox-30**, un facteur de transcription à spécificité de séquence appartenant à la famille SOX, qui régule des programmes d’expression génique du développement, avec des rôles importants dans la différenciation des cellules germinales et la spermatogenèse. En se liant à des éléments amplificateurs (enhancers) et promoteurs, Sox-30 module des réseaux transcriptionnels qui coordonnent les décisions de destinée cellulaire, l’engagement de lignée et le contrôle, associé à la chromatine, de l’expression de gènes spécifique de certains stades. Une expression dérégulée de **SOX30** a été rapportée dans plusieurs contextes tumoraux, où une altération de la régulation transcriptionnelle dépendante de Sox-30 est associée à des changements de prolifération, d’apoptose et d’états de différenciation cellulaire. Ces caractéristiques font de **SOX30** un nœud utile pour étudier les circuits transcriptionnels, les interactions entre voies de signalisation du développement et les mécanismes reliant les programmes de différenciation aux phénotypes oncogéniques.

Sox-30 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SOX30 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sox-30 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SOX30 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SOX30, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sox-30. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SOX30 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sox-30 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sox-30 dans les cellules tumorales présentant une expression de SOX30 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.