Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sox-3: sc-403896-ACT

SOX3 code le facteur de transcription Sox-3, membre de la famille SOXB1, qui se lie à l’ADN via une boîte HMG et régule des programmes d’expression génique gouvernant le maintien des progéniteurs neuraux, la spécification du neuroectoderme et l’organisation précoce du développement. En concertation avec d’autres régulateurs du développement, Sox-3 module des réseaux transcriptionnels contrôlant les décisions de destinée cellulaire, la prolifération et la différenciation, notamment des voies qui recoupent des signaux dépendants de Wnt/β-caténine et de Notch dans les tissus neuraux. Des altérations de la dose de SOX3 ou des perturbations de sa régulation ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et à des caractéristiques liées au système endocrinien, reflétant son rôle dans la formation de l’axe hypothalamo-hypophysaire et l’engagement de lignage. En tant que régulateur transcriptionnel dépendant du contexte, SOX3 est largement étudié dans des modèles de cellules souches pluripotentes, des systèmes de différenciation neuronale et des analyses mécanistiques du contrôle enhanceur–promoteur.

Sox-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SOX3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sox-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SOX3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SOX3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sox-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SOX3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sox-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sox-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de SOX3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.