Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sox-18: sc-402913-ACT

SOX18 code Sox-18, un facteur de transcription à boîte HMG qui se lie à l’ADN et coopère avec d’autres membres de la famille SOX pour réguler des programmes géniques contrôlant le développement vasculaire et lymphatique, la spécification endothéliale et la morphogenèse tissulaire. Sox-18 influence des réseaux transcriptionnels liés à l’intégrité des jonctions endothéliales, au bourgeonnement vasculaire et au remodelage, en interaction avec des axes de signalisation tels que les réponses angiogéniques induites par le VEGF et les circuits transcriptionnels du développement. Une activité de SOX18 altérée a été associée à une dérégulation de l’organisation des réseaux vasculaires/lymphatiques et à l’angiogenèse associée aux tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la plasticité des cellules endothéliales et de la régulation par le microenvironnement. Dans des modèles cellulaires humains, la modulation de l’expression de Sox-18 est couramment utilisée pour explorer les choix de lignée, la fonction de barrière et les réseaux de régulation génique vasculaire.

Sox-18 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SOX18 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sox-18 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SOX18 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SOX18, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sox-18. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SOX18 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sox-18 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sox-18 dans les cellules tumorales présentant une expression de SOX18 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.