Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sox-17: sc-401192-ACT

SOX17 code le facteur de transcription Sox-17, une protéine de liaison à l’ADN de type high-mobility group (HMG) qui joue des rôles essentiels dans la spécification de l’endoderme définitif, la mise en place des structures embryonnaires et l’engagement des lignages. Dans les cellules humaines, Sox-17 s’intègre aux programmes transcriptionnels associés à WNT/β-caténine, TGF-β/SMAD et Notch afin de réguler des gènes contrôlant la différenciation, l’organisation épithéliale et le timing du développement. Une expression altérée de SOX17 ou des perturbations de sa régulation ont été associées à des défauts des tissus dérivés de l’endoderme ainsi qu’à des phénotypes liés au cancer, notamment des modifications de la prolifération, de la migration et de la stabilité des états cellulaires. En tant que régulateur du développement, SOX17 est fréquemment utilisé comme marqueur et comme moteur fonctionnel dans les études de différenciation des cellules souches et de cartographie du destin cellulaire.

Sox-17 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SOX17 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sox-17 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SOX17 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SOX17, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sox-17. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SOX17 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sox-17 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sox-17 dans les cellules tumorales présentant une expression de SOX17 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.