Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sox-11: sc-401078-ACT

SOX11 code le facteur de transcription Sox-11, une protéine de liaison à l’ADN de type « high-mobility group » (HMG) qui régule des programmes d’expression génique contrôlant le développement neural, l’engagement de lignée et la différenciation cellulaire. Sox-11 s’intègre aux réseaux transcriptionnels du développement et à la régulation dépendante de la chromatine pour influencer des processus tels que la croissance des neurites, le maintien des progéniteurs et les transitions de destinée cellulaire. Une expression dérégulée de SOX11 a été associée à des perturbations de la signalisation développementale et à des états transcriptionnels aberrants observés dans plusieurs contextes pathologiques, notamment les troubles neurodéveloppementaux et l’oncologie. En tant que régulateur nucléaire, Sox-11 est fréquemment étudié pour ses gènes cibles en aval et son rôle dans le remodelage des circuits transcriptionnels lors du stress et de la différenciation.

Sox-11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SOX11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sox-11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SOX11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SOX11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sox-11. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SOX11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sox-11 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sox-11 dans les cellules tumorales présentant une expression de SOX11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.