Plasmide CRISPR/Cas9 KO Sox-1 (h): sc-401473

Présentation

SOX1 code pour le facteur de transcription Sox-1, membre de la famille SOXB1, fortement exprimé dans le neuroectoderme et les populations de progéniteurs neuraux. Sox-1 se fixe à l’ADN via son domaine HMG box afin de réguler des programmes génétiques qui contrôlent la spécification neurale, le maintien des progéniteurs et le calendrier de la différenciation, en interaction avec les voies de signalisation du développement et les réseaux de régulation de la chromatine. Dans les voies cellulaires, SOX1 contribue à des circuits transcriptionnels coordonnant la neurogenèse et la restriction de lignée, notamment via des interactions avec les processus de patterning associés à Notch, Wnt et SHH. Une expression dérégulée de SOX1 a été associée à des états développementaux aberrants et est étudiée dans des contextes tels que les tumeurs de lignée neurale et les syndromes neurologiques associés à des auto-anticorps, ce qui en fait un nœud utile pour la recherche mécanistique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Sox-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SOX1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SOX1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SOX1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Sox-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SOX1 pour l'étude de la signalisation de Sox-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SOX1 essentiels à la fonction de Sox-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SOX1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Sox-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Sox-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SOX1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Sox-1 plasmide HDR (h) et le Sox-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SOX1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SOX1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.