Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sox-1: sc-401473-ACT

SOX1 code le facteur de transcription Sox-1, une protéine de liaison à l’ADN contenant un domaine HMG (« high-mobility group ») qui joue un rôle central dans la spécification précoce du neuroectoderme et le maintien de l’identité des progéniteurs neuraux. Sox-1 régule des programmes transcriptionnels contrôlant l’engagement du destin cellulaire, le calendrier de différenciation et la régionalisation du tube neural, en s’inscrivant dans des réseaux plus larges de signalisation du développement qui recoupent les voies Wnt, Notch et Shh. En biologie humaine, les altérations de l’expression de SOX1 et des programmes de lignée associés sont pertinentes pour l’étude des dérégulations du neurodéveloppement ainsi que de la reprogrammation transcriptionnelle contextuelle observée dans des cancers présentant des caractéristiques de type « stem ». En tant que marqueur et régulateur de lignée, SOX1 est largement utilisé pour modéliser les trajectoires de différenciation neurale et pour explorer les réseaux de régulation génique dans des systèmes de cellules souches et progénitrices.

Sox-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SOX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sox-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SOX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SOX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sox-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SOX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sox-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sox-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SOX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.