Plasmide CRISPR d'Activation (m2) SOCS-3: sc-419666-ACT-2

Le gène murin Socs3 code le suppresseur de la signalisation des cytokines 3 (SOCS-3), un régulateur inductible de rétrocontrôle négatif qui atténue la signalisation des cytokines et des facteurs de croissance en inhibant l’activité de la kinase JAK et en favorisant, via son domaine SH2 et sa boîte SOCS, le renouvellement des composants de signalisation par un mécanisme dépendant de l’ubiquitine. SOCS-3 module les voies de la famille de l’IL-6 et du récepteur de la leptine, façonnant ainsi des programmes transcriptionnels dépendants de STAT3 qui contrôlent l’inflammation, la différenciation des cellules immunitaires et l’homéostasie métabolique. Une activité dérégulée de SOCS-3 a été associée à des états inflammatoires chroniques, à l’insulinorésistance et à des contextes de signalisation liés aux tumeurs, via une altération de la réactivité aux cytokines et de la polarisation des macrophages. L’édition du gène Socs3 dans des modèles murins soutient des études mécanistiques sur la dynamique des circuits JAK/STAT, la régulation transcriptionnelle induite par les cytokines et les contributions spécifiques de certains types cellulaires aux phénotypes immunitaires et métaboliques.

SOCS-3 Le plasmide d'activation CRISPR (m2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Socs3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SOCS-3 Le plasmide d'activation CRISPR (m2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Socs3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Socs3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SOCS-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Socs3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SOCS-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SOCS-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de Socs3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.