Particules Lentivirales d'Activation (h) SOAT2: sc-409713-LAC

SOAT2 (stérol O-acyltransférase 2 ; ACAT2) est une enzyme membranaire du réticulum endoplasmique qui catalyse la formation d’esters de cholestéryle à partir du cholestérol et d’acyl-CoA d’acides gras à longue chaîne, favorisant le stockage intracellulaire du cholestérol et l’assemblage des lipoprotéines. Elle est particulièrement abondante dans les hépatocytes et les entérocytes intestinaux, où elle contribue à l’absorption des lipides, à la sécrétion des VLDL et au maintien global de l’homéostasie des stérols. L’activité de SOAT2 s’articule avec les programmes métaboliques lipidiques pilotés par SREBP, le remodelage lipidique du RE et les réponses cellulaires à une surcharge en stérols, susceptibles d’influencer la biologie des cellules spumeuses et la signalisation inflammatoire. Une dérégulation du métabolisme des esters de cholestéryle impliquant SOAT2 est pertinente pour les mécanismes des maladies métaboliques et les pathologies associées aux lipides, étudiées dans des modèles de recherche sur l’athérosclérose, la stéatose hépatique et la dyslipidémie.

Les particules d'activation lentivirales SOAT2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SOAT2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales SOAT2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SOAT2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de SOAT2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SOAT2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.