Particules Lentivirales d'Activation (h) SOAT1: sc-417623-LAC

SOAT1 (stérol O-acyltransférase 1 ; ACAT1) est une enzyme membranaire du réticulum endoplasmique qui estérifie le cholestérol libre avec des acyl-CoA d’acides gras à longue chaîne afin de produire des esters de cholestérol destinés au stockage dans les gouttelettes lipidiques. En contrôlant l’équilibre entre le cholestérol non estérifié et les esters de cholestérol stockés, SOAT1 contribue à réguler la composition membranaire, l’homéostasie des stérols et la gestion des lipides associés aux lipoprotéines. L’activité de SOAT1 s’inscrit à l’interface du trafic du cholestérol, de la biologie des cellules spumeuses et de programmes métaboliques lipidiques plus larges qui influencent le stress oxydatif et la signalisation inflammatoire. Une accumulation dérégulée d’esters de cholestérol et des modifications de l’expression de SOAT1 ont été associées à la biologie des lésions athéroscléreuses et ont également été étudiées dans le contexte du remodelage lipidique tumoral et des déséquilibres du cholestérol liés aux maladies neurodégénératives.

Les particules d'activation lentivirales SOAT1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SOAT1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales SOAT1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SOAT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de SOAT1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SOAT1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.