Plasmide CRISPR/Cas9 KO SOAT1 (m): sc-423068

Présentation

Le gène murin *Soat1* code la stérol O‑acyltransférase 1 (SOAT1), une enzyme membranaire du réticulum endoplasmique qui estérifie le cholestérol libre en esters de cholestéryle en utilisant comme substrats des acyl‑CoA d’acides gras à longue chaîne. Cette réaction soutient l’homéostasie du cholestérol, la biogenèse des gouttelettes lipidiques et le remodelage des lipides membranaires, reliant ainsi SOAT1 au stockage lipidique cellulaire et aux réponses au stress du RE. L’activité de SOAT1 s’articule avec les voies de trafic du cholestérol et du métabolisme des lipoprotéines, et peut influencer la formation de cellules spumeuses ainsi que la gestion des lipides par les macrophages. Une accumulation d’esters de cholestéryle dépendante de SOAT1 et dérégulée a été associée à l’inflammation métabolique et à des pathologies liées aux lipides, faisant de *Soat1* une cible utile pour des études mécanistiques dans des modèles de maladies métaboliques et liées à l’athérosclérose.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SOAT1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Soat1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Soat1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Soat1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SOAT1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Soat1 pour l'étude de la signalisation de SOAT1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Soat1 essentiels à la fonction de SOAT1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Soat1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SOAT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SOAT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Soat1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SOAT1 plasmide HDR (m) et le SOAT1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Soat1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Soat1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.