Plasmide CRISPR d'Activation (h) SOAT1: sc-417623-ACT

SOAT1 (stérol O-acyltransférase 1 ; ACAT1) est une enzyme membranaire du réticulum endoplasmique qui catalyse l’estérification du cholestérol libre en esters de cholestéryle, contribuant à la biogenèse des gouttelettes lipidiques et à l’homéostasie du cholestérol cellulaire. En tamponnant l’excès de stérols, SOAT1 influence la composition des membranes, le métabolisme des lipoprotéines et les voies de signalisation sensibles aux stérols, notamment les programmes lipidiques régulés par SREBP et les réponses inflammatoires des macrophages. Une activité de SOAT1 altérée a été associée à la formation de cellules spumeuses, à des dérégulations lipidiques dans les maladies neurodégénératives et au remodelage métabolique observé dans plusieurs contextes tumoraux, où l’accumulation d’esters de cholestéryle peut corréler avec la prolifération et l’adaptation au stress. Ces caractéristiques biologiques font de SOAT1 une cible utile pour étudier le trafic des stérols, le stockage lipidique et les phénotypes dépendants du cholestérol dans des modèles cellulaires humains pertinents.

SOAT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SOAT1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SOAT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SOAT1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SOAT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SOAT1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SOAT1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SOAT1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SOAT1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SOAT1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.