Plasmide CRISPR/Cas9 KO SNX9 (m): sc-426112

Présentation

Snx9 code le tri nexine 9 (SNX9), un adaptateur doté de domaines SH3 et PX qui couple la liaison aux phosphoinositides au remodelage membranaire et à l’endocytose médiée par la clathrine. SNX9 coordonne l’assemblage des machineries endocytaire et de régulation de l’actine en interagissant avec la dynamine et N-WASP, ce qui soutient la scission des vésicules, l’internalisation des récepteurs et le trafic membranaire à la membrane plasmique. Par ces fonctions, SNX9 influence la dynamique de signalisation en aval des récepteurs internalisés et contribue à la réorganisation du cytosquelette lors de processus tels que la migration cellulaire et le renouvellement membranaire. Une dérégulation du trafic endocytaire et du contrôle de l’actine est impliquée dans des voies de signalisation liées au cancer et dans des phénotypes neurobiologiques, ce qui fait de Snx9 un nœud utile pour des études mécanistiques du réagencement des voies dans des contextes pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SNX9 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Snx9 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Snx9, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Snx9 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SNX9.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Snx9 pour l'étude de la signalisation de SNX9, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Snx9 essentiels à la fonction de SNX9
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Snx9 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SNX9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SNX9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Snx9. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SNX9 plasmide HDR (m) et le SNX9 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Snx9 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Snx9 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.