Plasmide CRISPR/Cas9 KO SNX5 (h): sc-404660

Présentation

Le gène humain **SNX5** (sorting nexin 5) code une protéine endosomale contenant un domaine PX, qui se lie aux phosphoinositides et coopère avec des facteurs de remodelage membranaire pour réguler le tri des cargos et le trafic vésiculaire. SNX5 participe aux voies endosome‑vers‑Golgi et de recyclage endosomal, favorisant le renouvellement des récepteurs et l’atténuation des signaux en contrôlant la localisation subcellulaire des protéines transmembranaires. Par ses rôles dans la tubulation des endosomes et l’assemblage de complexes protéiques, SNX5 influence des processus d’homéostasie cellulaire liés à la signalisation médiée par les récepteurs, à l’absorption des nutriments et à la composition membranaire. Des altérations des voies de trafic endosomal impliquant les sorting nexins sont associées à une dérégulation de la signalisation des facteurs de croissance et aux réponses au stress cellulaire, ce qui rend SNX5 pertinente pour des études mécanistiques des défauts de trafic associés aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SNX5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SNX5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SNX5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SNX5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SNX5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SNX5 pour l'étude de la signalisation de SNX5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SNX5 essentiels à la fonction de SNX5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SNX5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SNX5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SNX5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SNX5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SNX5 plasmide HDR (h) et le SNX5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SNX5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SNX5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.