Plasmide CRISPR/Cas9 KO SNAT2 (m): sc-426728

Présentation

Slc38a2 code, chez la souris, le transporteur d’acides aminés neutres couplé au sodium SNAT2 (SLC38A2), un transporteur du système A qui assure l’absorption de petits acides aminés neutres tels que la glutamine, l’alanine et la sérine de manière dépendante du Na⁺. SNAT2 participe à la détection cellulaire des nutriments et à l’adaptation métabolique, en reliant la disponibilité en acides aminés à des programmes sensibles au stress, notamment l’axe de la réponse intégrée au stress/ATF4, ainsi qu’à la régulation en aval de la signalisation mTORC1. En modulant les réserves intracellulaires d’acides aminés, SNAT2 influence l’équilibre redox, la bioénergétique et la synthèse protéique dans les cellules en prolifération et en différenciation. Les dérégulations du transport des acides aminés et de la gestion de la glutamine sont fréquemment étudiées dans des contextes tels que le remodelage métabolique, la fonction des cellules immunitaires et la biologie du cancer, ce qui fait de Slc38a2 un nœud pertinent pour explorer des phénotypes dépendants des nutriments dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SNAT2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Slc38a2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Slc38a2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Slc38a2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SNAT2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Slc38a2 pour l'étude de la signalisation de SNAT2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Slc38a2 essentiels à la fonction de SNAT2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Slc38a2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SNAT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SNAT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Slc38a2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SNAT2 plasmide HDR (m) et le SNAT2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Slc38a2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Slc38a2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.