Snapin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406317

Descripción general

SNAPIN codifica Snapin, una pequeña proteína citosólica que se asocia con la maquinaria SNARE y con complejos de anclaje para facilitar el acoplamiento de vesículas y la exocitosis regulada, especialmente en neuronas y células neuroendocrinas. Snapin se ha relacionado con el cebado de vesículas sinápticas, la liberación de neurotransmisores acoplada al calcio y el tráfico asociado a endosomas/lisosomas mediante interacciones que coordinan eventos de fusión de membranas. Al influir en la transmisión sináptica y el transporte intracelular, SNAPIN se estudia con frecuencia en vías relevantes para la conectividad neuronal, la función de la autofagia-lisosoma y la señalización sensible al estrés. Las alteraciones del tráfico dependiente de Snapin se han investigado en el contexto de mecanismos de enfermedades del neurodesarrollo y neurodegenerativas, en las que se ven alterados el transporte vesicular y la proteostasis.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Snapin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SNAPIN en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SNAPIN junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SNAPIN tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Snapin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SNAPIN para la investigación de la señalización de Snapin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SNAPIN críticos para la función de Snapin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SNAPIN para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Snapin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Snapin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SNAPIN. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Snapin (h) y el plásmido HDR Snapin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SNAPIN para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SNAPIN definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.