Smurf2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425947

Visão geral

Smurf2 (ligase de ubiquitina E3 específica de SMAD 2) é uma ligase de ubiquitina E3 do tipo HECT que regula a renovação (turnover) de proteínas e a amplitude do sinal em múltiplas vias, incluindo as de sinalização TGF-β/BMP e Wnt. Ao ubiquitinar substratos como os SMADs regulados por receptores e componentes de sinalização associados, Smurf2 ajuda a controlar programas transcricionais que governam proliferação, diferenciação e plasticidade epitélio–mesênquima. Smurf2 também contribui para a estabilidade do genoma e para respostas ao estresse celular por meio da modulação de proteínas associadas a dano no DNA e a checkpoints. A atividade desregulada de Smurf2 tem sido associada a alterações na homeostase tecidual e a fenótipos relevantes para o câncer, incluindo mudanças no controle de crescimento, na sinalização associada à fibrose e em características metastáticas, tornando-a um nó útil para estudos mecanísticos em modelos murinos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Smurf2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Smurf2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Smurf2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Smurf2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Smurf2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Smurf2 para a investigação da sinalização de Smurf2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Smurf2 críticos para a função Smurf2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Smurf2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Smurf2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Smurf2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Smurf2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Smurf2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Smurf2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Smurf2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Smurf2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.