Smurf2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401431-ACT

SMURF2 codifica a Smurf2, uma ligase E3 de ubiquitina com domínio HECT que regula o turnover de proteínas ao catalisar a ubiquitinação de componentes de vias de sinalização e do ciclo celular. A Smurf2 é mais conhecida por modular a sinalização de TGF-β/BMP por meio do controle dependente de ubiquitina de mediadores da via, influenciando assim a transição epitélio–mesênquima, a diferenciação e a homeostase tecidual. Ela também interage com respostas a dano no DNA e programas associados à senescência, conectando a sinalização por ubiquitina à estabilidade do genoma e à adaptação ao estresse. A atividade desregulada de SMURF2 e o desequilíbrio dessas vias têm sido associados a alterações dependentes do contexto na progressão tumoral, na sinalização relacionada à fibrose e em fenótipos inflamatórios, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos de crosstalk entre vias de sinalização.

Smurf2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SMURF2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Smurf2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SMURF2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SMURF2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Smurf2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SMURF2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Smurf2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Smurf2 em células tumorais com expressão de SMURF2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.