Plasmide CRISPR/Cas9 KO SMP30 (h): sc-401934

Présentation

Le gène humain **RGN** code la protéine marqueur de sénescence 30 (**SMP30/Regucalcin**), une protéine liant le calcium impliquée dans l’homéostasie du calcium cellulaire, l’équilibre rédox et la régulation métabolique. La SMP30 a été associée à la modulation de la signalisation intracellulaire dépendante du Ca2+, à la fonction mitochondriale et aux réponses au stress oxydant, des processus qui influencent la survie cellulaire et les phénotypes liés au vieillissement. Des altérations de l’expression de **RGN/SMP30** ont été rapportées dans des contextes impliquant le métabolisme hépatique, le stress inflammatoire et la biologie tumorale, ce qui en fait une cible pertinente pour disséquer les voies reliant la signalisation calcique à l’adaptation cellulaire au stress. L’étude de la perte de fonction ou de la dérégulation de RGN peut éclairer les mécanismes de sénescence, la capacité de détoxification et le remodelage métabolique dans des modèles cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SMP30 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RGN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RGN, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RGN à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SMP30.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RGN pour l'étude de la signalisation de SMP30, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RGN essentiels à la fonction de SMP30
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RGN pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SMP30 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SMP30 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RGN. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SMP30 plasmide HDR (h) et le SMP30 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RGN pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RGN définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.