SMP30 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401934

Übersicht

Das humane RGN kodiert das Seneszenzmarkerprotein 30 (SMP30/Regucalcin), ein calciumbindendes Protein, das an der zellulären Calciumhomöostase, dem Redoxgleichgewicht und der Stoffwechselregulation beteiligt ist. SMP30 wird mit der Modulation intrazellulärer Ca2+-abhängiger Signalwege, der Mitochondrienfunktion und der Reaktion auf oxidativen Stress in Verbindung gebracht – Prozesse, die das Zellüberleben und altersassoziierte Phänotypen beeinflussen. Eine veränderte RGN/SMP30-Expression wurde in unterschiedlichen Kontexten beschrieben, darunter Leberstoffwechsel, inflammatorischer Stress und Tumorbiologie, was das Gen für die Analyse von Signalwegen relevant macht, die Calciumsignale mit zellulärer Stressanpassung koppeln. Die Untersuchung des Verlusts oder der Fehlregulation von RGN kann Einblicke in Mechanismen der Seneszenz, der Entgiftungskapazität und der metabolischen Umprogrammierung in humanen Zellmodellen liefern.

Das SMP30 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RGN-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RGN-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RGN nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SMP30-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RGN-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SMP30-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RGN-Exone abzielen, die für die SMP30-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RGN-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SMP30 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SMP30 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RGN-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SMP30 HDR-Plasmid (h) und SMP30 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RGN-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RGN-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.