Particules Lentivirales d'Activation (h) SMG5: sc-406989-LAC

SMG5 code un composant central de la machinerie de dégradation des ARNm médiée par les codons non-sens (NMD), qui assure la surveillance et l’élimination des transcrits contenant des codons stop prématurés. SMG5 coopère avec SMG6 et SMG7 en aval de la phosphorylation d’UPF1 pour recruter des complexes de phosphatases protéiques et faciliter la déphosphorylation d’UPF1, couplant ainsi la terminaison de la traduction à la dégradation de l’ARNm. Par ce rôle, SMG5 contribue au contrôle qualité des ARN, façonne l’homéostasie du transcriptome et influence les réponses au stress cellulaire ainsi que les programmes de différenciation. Une NMD dérégulée et une fonction altérée de SMG5 ont été associées à des réseaux d’expression génique aberrants impliqués dans la biologie du cancer et dans des mécanismes de maladies neurodéveloppementales et neurodégénératives, faisant de SMG5 un nœud pertinent pour l’exploration des voies de signalisation.

Les particules d'activation lentivirales SMG5 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SMG5 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales SMG5 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SMG5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de SMG5. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SMG5 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.