Plasmide CRISPR d'Activation (h) SMG1: sc-404760-ACT

SMG1 code une kinase sérine/thréonine apparentée à la PI3K, qui agit comme composant central de la voie de dégradation des ARNm médiée par les codons non-sens (NMD) en phosphorylant UPF1 et en coordonnant la surveillance des transcrits contenant des codons stop prématurés. En régulant la stabilité des ARNm et la traduction, SMG1 contribue à la protéostasie, aux réponses cellulaires au stress et aux programmes d’intégrité du génome, qui recoupent la signalisation des dommages à l’ADN et le contrôle du cycle cellulaire. La perturbation de la NMD dépendante de SMG1 peut remodeler le contrôle qualité du transcriptome, en influençant les états de différenciation et les réseaux d’expression génique adaptatifs au stress. Une activité dérégulée de SMG1 a été associée à des phénotypes altérés de surveillance de l’ARN et de signalisation observés dans de multiples contextes pathologiques, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour étudier le métabolisme de l’ARN et les voies liées au stress.

SMG1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SMG1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SMG1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SMG1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SMG1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SMG1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SMG1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SMG1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SMG1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SMG1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.