Plásmido Doble Nickase (h) SMEK1: sc-412572-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)SMEK1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa SMEK1 (h) y el plásmido de doble nickasa SMEK1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PPP4R3A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) SMEK1 | sc-412572-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) SMEK1 | sc-412572-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PPP4R3A codifica SMEK1, una subunidad reguladora de la fosfatasa proteica 4 que ayuda a dirigir la actividad catalítica de PP4 hacia sustratos específicos y compartimentos subcelulares concretos. SMEK1 participa en el control dependiente de la fosforilación de la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la señalización adaptativa al estrés, al modular eventos de desfosforilación que moldean la cromatina y las salidas de los puntos de control. A través de estas funciones, PPP4R3A es relevante para mecanismos que influyen en la estabilidad del genoma y en programas de proliferación que con frecuencia se ven alterados en la biología del cáncer. La regulación de la fosfatasa vinculada a SMEK1 también se ha investigado en contextos de diferenciación y homeostasis tisular, donde la fidelidad de la señalización afecta a fenotipos celulares asociados a enfermedades.
SMEK1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PPP4R3A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PPP4R3A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PPP4R3A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PPP4R3A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.