SmcX CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405760-ACT

ヒトのKDM5Cは、Jumonji C（JmjC）ドメインを有するヒストン脱メチル化酵素であり、主にH3K4のメチル化を除去して転写プログラムを形成するクロマチン制御因子SmcXをコードしている。SmcXはプロモーターおよびエンハンサーのクロマチン状態を調節することで、RNAポリメラーゼII依存的な遺伝子発現、神経分化、ならびに細胞周期に連動した転写制御に影響を及ぼす。KDM5Cの活性は、クロマチンのアクセス性、DNA損傷応答、系譜特異的な遺伝子制御を協調させるエピジェネティック経路と連携している。KDM5Cの機能不全や変異は神経発達関連の表現型や転写恒常性の破綻と関連づけられており、クロマチン駆動性の疾患生物学を機構的に解明する研究の動機となっている。

SmcX CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KDM5Cの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SmcX CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KDM5C 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKDM5C転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SmcXの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKDM5C遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSmcX依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKDM5C発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSmcX経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。