Plasmide CRISPR/Cas9 KO SMCR7 (h): sc-406975

Présentation

MIEF2 code la protéine mitochondriale « mitochondrial elongation factor 2 » (SMCR7/MiD51), un adaptateur de la membrane externe des mitochondries qui régule la fission mitochondriale en recrutant et en organisant la GTPase DRP1. En contrôlant l’architecture du réseau mitochondrial, MIEF2 influence l’efficacité de la phosphorylation oxydative, l’équilibre des espèces réactives de l’oxygène (ROS) et les voies de contrôle qualité mitochondriales telles que la mitophagie, avec des répercussions sur le métabolisme cellulaire et les réponses au stress. Une activité altérée de MIEF2 a été associée à une dynamique mitochondriale déréglée observée dans les maladies neurodégénératives, les dysfonctions cardiométaboliques et la reprogrammation métabolique liée au cancer. En tant que nœud reliant la morphologie des organites à la signalisation bioénergétique, MIEF2 est fréquemment étudiée dans des travaux sur la susceptibilité à l’apoptose, la signalisation de l’immunité innée d’origine mitochondriale et l’adaptation à l’hypoxie ou au stress nutritionnel.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SMCR7 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MIEF2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MIEF2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MIEF2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SMCR7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MIEF2 pour l'étude de la signalisation de SMCR7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MIEF2 essentiels à la fonction de SMCR7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MIEF2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SMCR7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SMCR7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MIEF2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SMCR7 plasmide HDR (h) et le SMCR7 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MIEF2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MIEF2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.