SMCR7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406975

Übersicht

MIEF2 kodiert das mitochondriale Elongationsfaktor‑2‑Protein (SMCR7/MiD51), einen Adapter der äußeren Mitochondrienmembran, der die mitochondriale Spaltung reguliert, indem er die GTPase DRP1 rekrutiert und organisiert. Über die Kontrolle der Architektur des mitochondrialen Netzwerks beeinflusst MIEF2 die Effizienz der oxidativen Phosphorylierung, das Gleichgewicht reaktiver Sauerstoffspezies (ROS) sowie mitochondriale Qualitätskontrollwege wie die Mitophagie und wirkt dadurch auf den zellulären Stoffwechsel und Stressantworten ein. Veränderte MIEF2‑Aktivität wurde mit einer Fehlregulation der mitochondrialen Dynamik in Verbindung gebracht, wie sie bei Neurodegeneration, kardiometabolischen Funktionsstörungen und der krebsassoziierten metabolischen Umprogrammierung beobachtet wird. Als Knotenpunkt, der Organellenmorphologie mit bioenergetischer Signalgebung verknüpft, wird MIEF2 häufig in Studien zur Anfälligkeit für Apoptose, zur angeborenen Immun-Signalübertragung ausgehend von Mitochondrien sowie zur Anpassung an Hypoxie oder Nährstoffstress untersucht.

Das SMCR7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MIEF2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MIEF2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MIEF2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SMCR7-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MIEF2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SMCR7-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MIEF2-Exone abzielen, die für die SMCR7-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MIEF2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SMCR7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SMCR7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MIEF2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SMCR7 HDR-Plasmid (h) und SMCR7 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MIEF2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MIEF2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.