SMC6 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402805-ACT

SMC6 kodiert eine zentrale Untereinheit des SMC5/6-Komplexes, einer ATP-abhängigen Maschine zur chromosomalen Erhaltung, die während der DNA-Replikation und -Reparatur die Genomstabilität schützt. SMC6 unterstützt die Auflösung von Replikationsstress, die Reparatur von DNA-Doppelstrangbrüchen und die Regulation der homologen Rekombination und trägt damit zur Chromosomensegregation und zur Telomererhaltung bei. Über diese Funktionen ist SMC6 an der DNA-Schadensantwort sowie an checkpoint-gekoppelten Prozessen beteiligt, die die Anhäufung chromosomaler Aberrationen begrenzen. Eine Fehlregulation der Aktivität des SMC5/6-Komplexes wurde mit Phänotypen genomischer Instabilität in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie sowie für erbliche Syndrome mit Chromosomenbrüchigkeit und Replikationsstress relevant sind.

SMC6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SMC6-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SMC6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SMC6-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SMC6-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SMC6-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SMC6-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SMC6-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SMC6-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SMC6-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.