Plasmide CRISPR d'Activation (h) SMC1: sc-403715-ACT

SMC1B code une sous-unité de maintenance structurale des chromosomes (SMC) associée à la méiose, qui s’associe à des composants de la cohésine pour réguler la cohésion des chromatides sœurs, la synapsis des chromosomes et leur ségrégation fidèle au cours de la gamétogenèse. L’organisation de la chromatine à un niveau supérieur médiée par la cohésine influence le calendrier de réplication de l’ADN et les réponses aux dommages de l’ADN, reliant l’activité de la famille SMC aux voies de stabilité du génome et à la régulation transcriptionnelle. La dérégulation de la biologie de la cohésine est largement impliquée dans l’aneuploïdie, les mécanismes liés à l’infertilité et les cohésinopathies, et une fonction altérée de la cohésine est également pertinente pour l’instabilité chromosomique associée au cancer. Dans des modèles cellulaires humains, la modulation de l’expression de SMC1B soutient l’étude de l’architecture de la chromatine, des processus liés à la recombinaison et du contrôle du cycle cellulaire.

SMC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SMC1B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SMC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SMC1B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SMC1B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SMC1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SMC1B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SMC1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SMC1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SMC1B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.