Plasmide Double Nickase (h) SMARCA4/Brg1: sc-400168-NIC

SMARCA4 (Brg1) code le cœur catalytique ATPase du complexe de remodelage de la chromatine SWI/SNF (BAF), qui repositionne les nucléosomes afin de réguler des programmes transcriptionnels contrôlant la spécification de lignée, la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l'ADN et la différenciation. Par un remodelage de la chromatine dépendant de l'ATP, SMARCA4 influence l'accessibilité des enhancers et coopère avec des facteurs de transcription spécifiques de séquence pour moduler l'expression génique au sein de voies de développement et de réponse au stress. La perturbation de SMARCA4 dérègle l'état de la chromatine et la régulation du génome, et des altérations récurrentes sont associées à un contrôle épigénétique aberrant et à un câblage transcriptionnel oncogénique dans de multiples contextes tumoraux. En tant que régulateur central de la chromatine, SMARCA4 est largement étudié dans les domaines de l'accessibilité de la chromatine, de la cartographie des dépendances transcriptionnelles et des réseaux de létalité synthétique impliquant des sous-unités de SWI/SNF et la répression par Polycomb.

SMARCA4/Brg1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SMARCA4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SMARCA4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SMARCA4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SMARCA4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.