Plasmide Double Nickase (h) Smad8: sc-402119-NIC

SMAD9 code pour Smad8, un SMAD régulé par le récepteur, qui relaie les signaux des protéines morphogénétiques osseuses (BMP) depuis les récepteurs de type I activés jusqu’au noyau. Après phosphorylation en C-terminal, Smad8 forme des complexes avec SMAD4 et coordonne des programmes transcriptionnels contrôlant la différenciation ostéogénique et chondrogénique, le remodelage de la matrice extracellulaire et la mise en place des patrons développementaux. La signalisation BMP/SMAD dépendante de SMAD9 s’articule avec la voie MAPK et d’autres voies spécifiques du contexte afin d’ajuster l’amplitude et la durée du signal. La dérégulation de cet axe a été associée à des altérations de l’homéostasie squelettique et à des phénotypes de remodelage vasculaire, ce qui soutient des études mécanistiques de SMAD9 dans des modèles d’engagement de lignée et de remodelage tissulaire.

Smad8 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SMAD9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SMAD9. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SMAD9. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SMAD9.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.