Plasmide Double Nickase (h) Smad6: sc-401411-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Smad6 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Smad6 Double Nickase (h) et le plasmide Smad6 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SMAD6. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Smad6 Antibody (D-4): sc-25321
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Smad6 | sc-401411-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Smad6 | sc-401411-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SMAD6 code pour Smad6, un SMAD inhibiteur qui antagonise la signalisation de la superfamille BMP et TGF-β en interférant avec la phosphorylation des SMAD régulés par le récepteur et la formation de complexes transcriptionnels en aval. En atténuant les programmes dépendants des BMP, Smad6 contribue au contrôle de la différenciation ostéogénique, de la morphogenèse vasculaire et cardiaque, ainsi qu’à une régulation dépendante du contexte des réponses inflammatoires et de la matrice extracellulaire. Une activité altérée de SMAD6 a été associée dans la littérature à des phénotypes cardiovasculaires et craniofaciaux congénitaux, ainsi qu’à des processus de remodelage tissulaire dérégulés dans lesquels l’équilibre BMP/TGF-β est déterminant. En tant que régulateur de rétrocontrôle négatif, SMAD6 est fréquemment étudié pour définir les seuils de voie, la durée du signal et les interactions avec les MAPK et le renouvellement des composants de signalisation médié par l’ubiquitine.
Smad6 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SMAD6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SMAD6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SMAD6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SMAD6.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.